Sự khác biệt giữa RT PCR và QPCR | RT PCR và QPCR

Sự khác biệt chính - RT PCR và QPCR

Phản ứng chuỗi Polymerase là một kỹ thuật được sử dụng để khuyếch đại một vùng DNA đặc hiệu trong ống nghiệm. Do phát minh ra kỹ thuật này bởi Kary Mullis vào năm 1983, các nhà khoa học có thể tạo ra hàng ngàn đến hàng triệu bản sao của các đoạn DNA cụ thể cho mục đích nghiên cứu. Hiện nay nó đã trở thành một kỹ thuật phổ biến và thường xuyên thực hiện trong các phòng thí nghiệm lâm sàng và nghiên cứu cho nhiều ứng dụng rộng rãi. Có nhiều cách khác nhau của kỹ thuật PCR truyền thống như RT PCR, PCR nested, multiplex PCR, PCR Q, RT-QPCR, vv RT PCR và PCR PCR là hai biến thể quan trọng của PCR. Sự khác biệt quan trọng giữa PCR RTR và PCR PCR là PCR RTR được sử dụng để phát hiện biểu hiện gen thông qua việc tạo ra các bản sao của DNA bổ sung DNA (cDNA) từ RNA trong khi Q PCR được sử dụng để đo lường số lượng các sản phẩm PCR thời gian thực bằng cách sử dụng thuốc nhuộm huỳnh quang. NỘI DUNG

1. Tổng quan và Chênh lệch khác nhau

2. RT PCR là gì?

3. QPCR là gì

4. So sánh Side by Side - RT PCR và QPCR

5. Tóm tắt

RT PCR là gì?

Phản ứng chuỗi polymerase đảo ngược (RT PCR) là một biến thể của PCR được sử dụng để phát hiện RNA biểu hiện. Đây là một phương pháp rất quan trọng để phát hiện biểu hiện mRNA trong mô. RT PCR được sử dụng khi vật liệu ban đầu của mẫu là RNA. Trong RT PCR, khuôn mẫu mRNA lần đầu tiên được chuyển đổi thành DNA bổ sung. Bước này được xúc tác bởi men sao chép ngược và quá trình được gọi là sao chép ngược. Thứ hai, PCR truyền thống được sử dụng cho cDNA mới được tổng hợp để khuếch đại.

RT-PCR là một kỹ thuật rất nhạy cảm đòi hỏi một lượng tương đối nhỏ mẫu RNA. RT PCR thường được sử dụng trong chẩn đoán và định lượng các loài RNA, đặc biệt là các vi rút RNA như virus gây suy giảm miễn dịch ở người và virus viêm gan C.

Hình 01: Kỹ thuật RT PCR

QPCR là gì?

PCR định lượng (QPCR) là một biến thể của PCR được sử dụng để định lượng đo các sản phẩm PCR. Nó cũng được gọi là phản ứng dây chuyền polymerase thời gian thực vì nó đo sự khuếch đại thời gian thực bằng máy PCR thời gian thực. Đây là một phương pháp phù hợp để xác định số lượng của một chuỗi mục tiêu hoặc gen hiện diện trong một mẫu. Tính năng thú vị của QPCR là nó kết hợp cả khuếch đại và định lượng đúng thành một bước. Do đó, kỹ thuật QPCR có thể loại bỏ được sự cần thiết của điện di gel trong quá trình phát hiện. QPCR sử dụng thuốc nhuộm huỳnh quang để ghi nhãn các sản phẩm PCR trong phản ứng PCR cuối cùng dẫn đến định lượng trực tiếp.Khi các sản phẩm PCR tích tụ, các tín hiệu huỳnh quang cũng được tích lũy và nó sẽ được đo bằng máy thời gian thực. QPCR có thể được kết hợp với PCR RT. Nó được gọi là RT - QPCR hoặc QRT - PCR và được coi là một phương pháp mạnh mẽ, nhạy cảm và định lượng để phát hiện mức RNA trong tế bào hoặc các mô.

SYBR Green và Taqman là hai phương pháp được sử dụng để phát hiện hoặc xem quy trình khuếch đại của PCR thời gian thực. Phương pháp SYBR Green được thực hiện bằng cách sử dụng thuốc nhuộm huỳnh quang gọi là SYBR xanh và phát hiện khuếch đại bằng cách ràng buộc chất nhuộm để tạo ra DNA kép. Taqman được thực hiện bằng cách sử dụng các đầu dò kép có nhãn và phát hiện sự khuếch đại bởi sự xuống cấp của đầu dò bởi Taq polymerase và các chất phóng xạ của chất fluorophore như thể hiện trong hình 02. Cả hai phương pháp này đều theo dõi tiến trình của quá trình khuếch đại và báo cáo số lượng thời gian thực của sản phẩm.

PCR thời gian thực có rất nhiều ứng dụng như định lượng biểu hiện gen, phân tích RNA microRNA và không mã hóa, SNP genotyping, phát hiện các biến thể số sao chép, phát hiện các đột biến hiếm, phát hiện các sinh vật biến đổi gen, phát hiện các tác nhân gây bệnh, vv.

Hình 02: Kỹ thuật PCR định lượng

Sự khác nhau giữa RT PCR và QPCR là gì?

- Điều khác giữa bài báo trước khi bàn ->

RT PCR và QPCR

RT PCR là một kỹ thuật được sử dụng để phát hiện biểu hiện gen bằng cách khuếch đại.

QPCR là một kỹ thuật khuếch đại DNA và định lượng các sản phẩm PCR trong thời gian thực.

Sự tham gia của transcriptase sao chép ngược Enzyme
Enzyme reverse transcriptase được sử dụng cho RT PCR.	Enzyme reverse transcriptase không được sử dụng cho QPCR.
Sử dụng các phân tử có ghi nhãn huỳnh quang
Thuốc nhuộm hoặc đầu dò có nhãn huỳnh quang không được sử dụng cho RT PCR.	Thuốc nhuộm hoặc đầu dò có nhãn hiệu huỳnh quang được sử dụng cho QPCR.
Định lượng sản phẩm PCR
Trừ khi kết hợp với QPCR, RT PCR không định lượng được sản phẩm PCR.	QPCR định lượng đo lường sản phẩm PCR.
Chất liệu bắt đầu
Chất liệu khởi đầu là mRNA.	Nguyên liệu ban đầu là DNA.
Tổng hợp DNA cDNA
Bổ sung DNA được tạo ra trong thời gian RTR PCR.	Không bổ sung ADN trong QPCR.
Tóm tắt - RT PCR và QPCR
RT PCR và QPCR là hai phiên bản PCR truyền thống. Kỹ thuật RT PCR được thực hiện cho các mẫu mRNA và nó được điều khiển bằng cách sao chép ngược và sản xuất cDNA. QPCR được sử dụng để định lượng các sản phẩm PCR trong thời gian thực PCR chu kỳ nhiệt bằng cách sử dụng thuốc nhuộm huỳnh quang hoặc đầu dò nhãn. Trong QPCR, số lượng sản phẩm PCR được thể hiện bằng các tín hiệu huỳnh quang phát ra từ mẫu. RT PCR được sử dụng phổ biến như một quá trình khuếch đại trong khi QPCR thường được sử dụng như là một quá trình định lượng. Đây là sự khác biệt giữa RT PCR và QPCR.	Tài liệu tham khảo:

1. Deepak, SA, KR Kottapalli, R. Rakwal, G. Oros, KS Rangappa, H. Iwahashi, Y. Masuo và GK Agrawal. "Thời gian thực PCR: Cách mạng hoá phát hiện và phân tích biểu hiện của các gen. "Genomics hiện tại.Nhà xuất bản Khoa học Bentham, tháng 6 năm 2007. Web. 03 tháng 4 năm 2017

2. Zeka, Fjoralba, Katrien Vanderheyden, Els De Smet, Claude A. Cuvelier, Pieter Mestdagh và Jo Vandesompele. "Phân tích biểu hiện gien gen RT-qPCR trực tiếp và nhạy cảm đối với các mẫu FFPE. "Thiên nhiên Tin tức. Nature Publishing Group, ngày 22 tháng 2 năm 2016. Web. 03 tháng 4 năm 2017

3. Overbergh, L., A. Giulietti, D. Valckx, B. Decallonne, R. Bouillon, và C. Mathieu. "Sử dụng PCR phiên mã ngược thời gian thực để định lượng biểu hiện gen của tế bào Cytokine. "Tạp chí Kỹ thuật Biomolecular: JBT. Hiệp hội các Cơ sở Tài nguyên Biomolecular, tháng 3 năm 2003. Web. 03 tháng 4 năm 2017

Hình ảnh được phép bởi:

1. "Taqman" Người dùng: Braindamaged - Tác phẩm của chính tác giả tải lên gốc (Public Domain) qua Commons Wikimedia

2. "Phản ứng chuỗi polymerase phiên mã ngược" By Jpark623 - Tác phẩm của chính mình (CC BY-SA 3. 0) thông qua Commons Wikimedia